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香豆素

  当归中1个新香豆素类化合物及其细胞毒活性_化学_自然科学_专业材料。? 2 6 8 0? 焉 Ch i n e s e T r a d i t i o n a l a n dHe r b a l Dr u g s 第4 6 卷 第l 8期 2 0 1 5 年

  ? 2 6 8 0? 焉 Ch i n e s e T r a d i t i o n a l a n dHe r b a l Dr u g s 第4 6 卷 第l 8期 2 0 1 5 年 9月 当归 中 1 个新香豆素类化合物及其细胞 毒活性 周 堑,王月德 ,董 伟 ,刘贵有,李丽梅 ,娄 洁,胡秋芬,叶艳青,周 敏 云南 民族大学 民族 药资源化 学邦度 民委指导部重 点实习 室,云南 昆明 6 5 0 5 0 0 摘 要 :目标 钻研当归 A n g e l i c a s i n e n s i s 干燥根的化学因素 。格式 行使硅胶、凝胶 、MC I . Ge l 树脂及 R P . H P L C等众种色 谱时间差别纯化 ,并遵照理化本质和波谱数据判断化合物的构造。结果 和2 . 8 ̄ m a o l / L 。结论 的体外细胞毒活性 。 从当归干燥根 9 5 %乙醇提 取物 平分 离得 到了 1个 新香豆素类化合物 ,判断为 6 . 羟基. 3 . ( 4 . 羟基苯) . 7 . 甲基. 香豆素 ( 1 ) ;化 合物 1对 A5 4 9和 MC F . 7细胞株 I C 5 0 值分 别为 3 . 2 化合物 1为 1 个新 的香豆素类化合物 ,定名 为云 归香豆素 A;其对 A5 4 9和 MC F . 7细胞株外示 了显着 闭 键 词 :当 归 ;香 豆 素 ;细 胞 毒 活 性 ;6 - 羟基一 3 一 ( 4 . 羟基苯) . 7 。 甲基 . 香豆素;云归香豆素 A 中图分类号 :R 2 8 4 . 1 文献符号码 :A 作品编号 :0 2 5 3. 2 6 7 0( 2 0 1 5 ) 1 8. 2 6 8 0. 0 3 D oI : 1 0 . 7 5 0 1  ̄ . i s s n . 0 2 5 3 . 2 6 7 0 . 2 0 1 5 . 1 8 . 0 0 3 A ne w c o u ma r i n f r o m r o o t s o f An ge l i c a s i ne n s i s a nd i t s c y t o t o x i c i t y Z H O UK u n , WA NGY u e - d e , D O NGWe i , L 1 UG u i — y o u , L I L i — me i , L O U J i e , HUQ i u — f e n , Y EY a n - q i n g , Z H O UMi n Ke y La b o r a t o r y o f Ch e mi s t y r i n Et h n i c Me d i c i n a l Re s o u r c e s , S t a t e Et h n i c Af fa i r s Co m mi s s i o n& M i n i s t r y o f Ed u c a t i o n , Yu n n a n Mi n z u Un i v e r s i t y , Ku n mi n g 6 5 0 5 0 0 , Ch i n a Ab s t r a c t : Ob j e c t i v e T o s t u d y t h e c h e mi c a l c o n s t i t u e n t s f r o m he t r o o t s o f A n g e l i c a s i n e n s i s . Me t h o d s T h e c h e mi c a l c o n s t i ue t n t s i n t h e r o o t s o f A. s i n e n s i s we r e s e p a r a t e d a n d p u i r ie f d t h r o u g h v a r i o u s k i n d s o f c h r o ma t o g r a p h i c me t h o d s , i n c l u d i n g s i l i c a g e l , M CI - Ge l , S e p h a d e x L H? 2 0 ,a n d RP - HPL C.T h e i r s t r u c t u r e s we r e e l u c i d a t e d b y s p e c t r a l d a t a a n d p h y s i c a l - c h e mi c a l p r o p e r t i e s .Re s u l t s 6 - H y d r o x y 一 3 - ( 4 - h y d r o x y p h e n y 1 ) - 7 一 me t h y 1 - c o u ma r i n( 1 )wa s i s o l a t e d f r o m t h e 9 5 % e t h a n o l e x r t a c t s o f t h i s p l a n t . Co n c l u s i o n Co mp o u n d 1 i s a n e w c o mp o n d u , n a me d An g e l i c a c o u ma r i n A. An d i t d i s p l a y s he t c y t o t o x i c i t y a g a i n s t A5 4 9 nd a M CF 7 c e l l s wi t h I C5 o v a l u e s o f 3 . 2 a n d 2 . 8  ̄ mo l / L ,香豆素3羧酸的合成 r e s p e c t i v e l y . Ke y wo r d s : A n g e l i c a s i n e n s i s ( Ol i n ) Di e l s ; c o u ma r i n ; c y t o t o x i c i t y ; 6 - h y d r o x y - 3 - ( 4 一 h y d r o x y p h e n y 1 ) 一 7 一 me t h y 1 一 c o u ma r i n ; An g e l i c a c o u ma r i n A 当归为 伞形科 植物 当归An g e l i c a s i n e n s i s ( O l i v . ) 是 ,产 自云 南鹤庆 马厂 的 当归 以个 大 、 肉肥 和挥 发 油量 高而 居全 邦当归之 冠 。为深 入 了然该 地 区当 归 的化学 因素 ,本 实习对 其 展开 了体系 钻研 ,从 其干 D i e l s 的干燥根 。 其性温, 味甘 、 辛, 具有补血活血 、 调 经止 血 、润肠 滑肠 之功 效 ,是常 用 中药材 ,医家 素有 “ 十方 九 归 ”之 称 ,除 中医处 方配 方用 药外 , 含 当 归的 中成药 就 众达 8 0余种 。 研 究外 明 , 当 归属 燥根 9 5 %乙醇提 取物 平分 离得 到 1 个 新 的香豆 素类 化合物 6 . 羟基 . 3 . ( 4 . 羟 基苯 ) 一 7 .甲 基 . 香 豆 素 [ 6 - h y d r o x y - 3 - ( 4 一 h y d r o x y p h e n y 1 ) - 7 一 me t h y l - c o u ma r i n , 1 1 ,命 名 为云 归香豆 素 A。体 外细胞 毒 活性检 测 结 果 外 明该化 合物对 A5 4 9和 MC F . 7细胞 外示 出较 强 植 物主 要含 有 众糖 、有机 酸 、黄 酮、藁 本 内酯和 香 豆 素等 众种 类 型 的化 合物 [ 1 - 3 ] 。 大宗 的现 代药 理研 究 外 明,当 归及 其闭键 化 学成 分外 现 出广 泛 的生物 活 性 ,对 制血 系 统 、循 环 体系 、神 经系 统 、免疫 体系 的体外 细胞 毒活 性 。 1 仪 器 与质料 等 均 有药 理作 用【 1 J 。香豆素类抗凝药研 究还 外 明,从 当归丙 酮提取 物L 4 J 以及从 中得 到的极少重 要活性 因素…,其 体 内、 外实 验研 究均 显示 肯定 的抗 肿瘤 活性 。值 得一 提 的 UV - 2 4 0 1 A紫 外光 谱仪 ( 日本 岛津 公司 ) ;J a s c o J 一 8 1 0 圆二 色 光 谱 仪 ( 日本 分 光 公 司 ) ;Bi o — Ra d 收稿 日期 :2 0 1 5 - 0 6 . 2 7 基金 项 目: 邦度 自然科 学基 金资 助项 目 ( 2 1 3 6 2 0 4 4 ,2 1 0 3 2 0 8 5 ) ;云南 省高校 科 技立异 团 队资助 项 目 ( I R T S T YN 2 0 1 4 — 1 1 ) 作家 简 介 :周 通 信 作家 周 堑 ( 1 9 9 O 一) , 男,云 南大 理人 ,硕 士正在 读 ,从事 中药 及天 然药 物活 性成 分研 究 。 敏 ,男 ,讲师 ,硕士 生导 师 。T e l : ( 0 8 6 ) 6 8 3 2 9 0 4 5 E . ma i l : z h o u mi n y n u n @1 6 3 . t o m 中草' 6 Ch i n e s e T r a d i t i o n a l a n d He r b a l Dr u g s 第4 6 卷 第1 8 期 2 0 1 5 年 9月 ? 2 6 8 1? F T S 一 1 8 5傅里 叶变 换红 外光 谱仪 ( 美 邦伯乐 B i o . R a d 公司 ) ;DR X. 5 0 0核磁共 振 仪 ( 瑞 士 布鲁 克公 司 ) ; 半制 备 HP L C分 析仪 器 为 岛津 L C 一 8 A型 高效 液相色 谱 仪 ,色 谱 柱 为 安 捷 伦 公 司 Z o r b a x P r e p HT GF C 一 3 、H. 4与 C 一 1 的相 闭 ( 图 1 ) ,从而 证 实 了对羟 基苯 基 代替正在 母 核 的 C . 3位上 。进 一步 遵照 甲基氢 H. 1 ” 与C . 6 、 C 7 、 C . 8的 HMB C相 闭 以及酚 羟基氢 6 - O H与 C . 5 、C 一 6 、C 一 7的H MB C相干确 定 了甲基 和 酚羟 基分 别取 代正在 香豆 素母 核 的 C . 7 和C 一 6 位上 。 ( 2 5 0 mm×2 1 . 2 mm,5 u m) 。 柱色 谱 硅 胶 ,G F 2 5 4 ( 1 0 0 mm×1 0 0 mm)硅 胶 板 ,均 为青 岛海 洋 化工 厂 产 品; 反相填 充材 料 R P _ l 8( 4 0  ̄6 3岬 ) ,Me r k公 司 ;MC I填 充质料 为 MC I . g e l C HP . 2 0 P( 7 5 ~1 5 0 g m) ;凝 胶 为 S e p h a d e x L H 一 2 0 ;提 取用 工业 三氯 甲 于是 ,化合 物 的构造 确 定为 6 . 羟 基. 3 . ( 4 一 羟基 苯) . 7 . 甲基. 香豆 素 。经文 献检 索 ,该化 合物 为新 化合 物 , 定名 为云 归香豆 素 A。 外 1 化合 物 1 的H— NMR、” C. N MR 和 HMB C 数据 ( 5 0 0 / 1 2 5 MHz , C 5 Ds N) T a b l e 1 H— NM R. ”C. NM R , a n d HM BC d a t a o f c o mp o u n d 烷 、 甲醇 、醋 酸 乙酯 、石 油醚 ;超 纯水 。 当 归样 品购 于云 南省 昆明市 中药材批 发 商场 , 产地 为 云南鹤 庆 马厂 ,经 云南 民族 大学 民族 药 资源 1( 5 0 0 / 1 2 5 M Hz , Cs Ds N) 化学邦度 民委指导部中心实习室杨青松教练判断为 伞 形 科植 物 当归 A n g e l i c a s i n e n s i s ( Ol i v . Di e l s 。 样 品 破碎到 4 0目,备 用 。 碳位 c ( D E P T ) H MB C( H —C ) 2 提 取 与分 离 取粉 碎后 确当归样 品 1 . 6 k g ,粉 碎 ,香豆精9 5 %乙醇 超声 浸泡 提取 4次 , 每 次用 2 . 0 L 9 5 %乙醇室 温浸 泡 后超 声 ( 每次 3 0 ai r n ) ,然后 滤过 ,减 压浓 缩得 浸 膏 ,合 并得 到浸 膏 8 5 I 3 g 。浸 膏经 硅胶 柱色 谱 , 以 氯仿 . 甲醇 ( 2 0: 1 、9: 1 、8: 2 、7: 3 、6: 4 、5: 5 )梯 度 洗脱 ,分成 6个部 分 。将 氯仿 . 甲醇 8: 2洗 脱部 分 再次用 氯 仿一 丙酮 梯度洗 脱 ,分成 8: 2 、7: 3 、6: 4 、5: 5 、4: 6 、纯 丙酮 6个 片面,采用氯仿一 丙酮 6: 4 部 分实行 H P L C的进 一 步分 离 。 用A g i l e n t 公司的 Z o r b a xP r e p HTGF ( 2 1 . 2 ml T l ×2 5 c m)反相 柱 ,以 3 8 %甲醇为流 动 相 ,体 积流 量为 1 5 mL / mi n , 纯化 得 到化 合物 1( 1 2 . 2 mg ) 。 3 构造 鉴 定 化 合物 1 :橙 黄色 胶状 物 ,H R — E S I . MS显 示其 准分子离子峰为 2 6 7 . 0 6 6 3 [ M—H ] 一( c 1 6 H l 1 O 4 ,计 算值 2 6 7 . 0 6 5 7 ) ,连结 H - NMR和 DE P T谱确 定其 分 子式 为 C 1 6 H1 2 O4 。 其 红外 光谱 3 4 4 8 , 1 7 1 5 , 1 6 0 0 , 妒 C 1 5 4 3 , 1 4 8 2 c m- 显示 了强 的吸 收 , 提 示 了化 合 物 中 存 正在 羟 基 、羰 基 和 芳环 的 共 振 吸 收 ;紫 外 光 谱 正在 图 1 化 合 物 1的 主 要 HMB C 相 闭 Fi g . 1 Ke y HM BC c o r r e l a t i o n s o f c o mp o u n d 1 2 8 2 、2 3 1 和2 1 0 n m 有最 大 招揽 也证 实化 合物 中存 正在 芳环 构造 。从 H. 和” C - NMR 谱 ( 外 1 )中可 以 4 化合 物 的细 胞毒 活性 显着 观 测 到 1组 3 , 6 , 7 一 三 取 代 香 豆 素 母 核 的信 号 ( C 一 2 ~C . 1 0 ;H. 4 、H. 5和 H. 8 )L 5 1 、 1组 对羟 基苯 基信 号 ( C . 1 ~C . 6 ;H. 2 , 6 、H. 3 , 5 )L 6 J 、1 个甲 基信 号 ( C 一 1 ” 和 H. 1 ” ) 、2个酚 羟基信 号 ( 1 0 . 8 l , 由 于 有 文 献 报 道 当 归 提 取 物 】 及 其 所 含 化 合 物[ ] 具 有 显着 的抗 肿 瘤 活 性 ,因 此对 化合 物 1 进 行 了细胞 毒活 性筛 选 ;细胞 毒活 性检 测参 照文 献采用 改 良的 MT T测 定法[ ,以紫 杉 醇 为阳性 比照 ,所测 1 1 . 0 9 ) 。化 合 物 1 中各 取 代 基 的位 置进 一 步通 过 H MB C确 定 。正在 HMB C谱 中 ,观测 到 了 H. 2 . , 6 与 试细 胞株 为 N B 4 、A5 4 9 、S HS Y5 Y、P C 3和 MC F . 7 ( 外 2 ) 。 ? 2 6 8 2? 焉 Ch i n e s e T r a d i t i o n a l a n d He r b a l Dr u g s 第4 6 卷 第1 8期 2 0 1 5年 9月 陈慧珍.当归的钻研进步 [ J 】 . 海 峡药学,2 0 0 8 ,香豆素的基本母核是2 0 ( 8 ) : 8 3 — 8 5 . Ch n gY L, a Ch a n gW L, Le e SC, e t a 1 . Ac e t o n e e x t r a c t o f An g e l i c a s i n e n s i s i n h i b i t s p r o l i f e r a t i o n o f h u ma n c a n c e r 外 2 化合物 1的细胞毒活性 T a b l e 2 Cy t o t o x i c a c t i v i t y o f c o mp o u n d 1 c e l l s v i a i n d u c i n g c e l l c y c l e a r r e s t a n d a p o p t o s i s[ J ] . L f / e &f , 2 0 0 4 , 7 5 ( 1 3 ) : 1 5 7 9 - 1 5 9 4 . L i Y K, Zh o u B, Wu X X, a 1 .P h e n o l i c c o mp o u n d s 结 果外 明 ,化 合物 l对所 选 的 5株肿 瘤细 胞 的 f r o m Ca s s i a s i a me a nd a t h e i r a n t i . t o b a c c o mo s a i c v i r u s I C 5 0 值均 小于 1 0 ̄ t mo l / L,其 中对 A5 4 9和 MC F 一 7 细胞 具有 较 高的细 胞毒 活性 ,其 I c 5 0 值 离别 为 3 . 2 和 2 . 8 ̄ t mo l / L。 参考文献 [ 1 ] 李 [ 2 ] 苛 曦,张丽宏 ,王晓晓,等.当归化学因素及 药理作 辉 ,段金廒,钱大玮,等.我 邦不 同产地 当归药材 用钻研进步 [ J ] .中药材, 2 0 1 3 , 3 6 ( 6 ) : 1 0 2 3 . 1 0 2 8 . a c t i v i t y【 J ] . C h e m Na t C o m p , 2 0 1 5 , 5 1 ( 1 ) : 5 0 — 5 3 . Le i C, Xu W Wl u J , a 1 . Co u ma r i n s f r o m t h e Ro o t s a n d S t e ms o f Ni c o t i a n a mb a c u ma nd t h e i r a n t i — t o b a c c o mo s a i c c i us r a c t i v i t y[ J ] . C h e m N a t C o m p , 2 0 1 5 , 5 1 ( 1 ) : 43. 46. Z h o u M, Mi a o M M,D u G , e t a 1 .A s p e r g i l l i n e s A — E , h i g h l y o x y g e n a t e d h e x a c y c l i c i n d o l e ? - t e t r a h y d r o f u r a n ? - 质 量的了解与评议 1 9 88 . 1 992 [ J ] .中 草 药 ,2 0 0 9 ,4 0 ( 1 2 ) : t e t r a mi c a c i d d e r i v a t i v e s r f o m A s p e r g i l l u s v e r s i c o l o r[ J ] . O r g L e t t , 2 0 1 4 , 1 6 ( 1 9 ) : 5 0 1 6 — 5 0 1 9 . 嘲


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